摘要:腹腔注射是一种简单且方便给药的方式，为了验证腹腔注射腺病毒pMultiRNAi-Ldhc对高原鼠兔（Ochotona curzoniac）骨骼肌Ldhc基因沉默的可行性，将27只高原鼠兔分为干扰组、空壳组和空白对照组，每组各9只个体，干扰组和空壳组分别注射0.65 ml腺病毒pMultiRNAi-Ldhc和腺病毒pMultiRNAi-NS，空白对照组注射等量生理盐水，注射后7 d检测骨骼肌中Ldhc基因mRNA和蛋白的表达水平，测定了乳酸脱氢酶（LDH）活性和乳酸（LD）及三磷酸腺苷（ATP）的含量。结果表明，与空白对照组相比，干扰组在mRNA和蛋白水平上，Ldhc基因表达分别降低了41.73%和15.76%；乳酸脱氢酶（LDH）活性、乳酸（LD）和ATP含量分别降低了23.98%、51.08%和19.29%。结果说明，腹腔注射腺病毒pMultiRNAi-Ldhc能有效沉默骨骼肌中Ldhc基因表达。

摘要:高原鼢鼠（Myospalax baileyi）是青藏高原特有的地下鼠，其地下洞道严重缺氧。一般来说，低氧会促进细胞凋亡。为了探讨高原鼢鼠适应低氧环境的分子机制，本文应用生物信息学方法对p53下游凋亡促进基因Pidd、Fas、Bax、Puma、Apaf-1、Scotin、Perp、Igfbp3和凋亡抑制基因Bcl-2的序列和编码的氨基酸序列进行了进化分析，并以SD大鼠（Rattus norvegicus）为对照，研究了这些基因在不同海拔环境条件下（3 300 m和2 260 m）的表达模式。结果表明：（1）高原鼢鼠细胞凋亡基因的序列与以色列鼹鼠（Nannospalax galili）同源性最高；预测的PIDD、PUMA、Apaf-1、IGFBP3和BCL-2编码蛋白结构域与以色列鼹鼠的存在明显的趋同进化位点；SIFT评估发现，高原鼢鼠和以色列鼹鼠与其他物种相比，p53、PIDD、PUMA、Apaf-1和IGFBP3氨基酸序列分别在78、853、157、320和285号位点的变异对其功能有显著影响；（2）在高海拔条件下（3 300 m），高原鼢鼠肺组织中凋亡促进基因Pidd、Bax、Puma和Apaf-1表达水平显著下降，凋亡抑制基因Bcl-2表达水平显著升高，而在SD大鼠中凋亡促进基因和凋亡抑制基因的表达水平均没有变化；高原鼢鼠中Bcl-2/Bax比值随海拔的升高显著上升，而在SD大鼠中没有变化。以上结果提示，高原鼢鼠p53结构变异可能导致其下游基因表达模式与SD大鼠不同，其中凋亡促进基因Pidd、Bax、Puma和Apaf-1表达水平下降，凋亡抑制基因Bcl-2表达水平上升，从而抑制了细胞在低氧条件下的凋亡；在长期低氧的作用下，高原鼢鼠p53下游基因产物PIDD、PUMA、Apaf-1和IGFBP3产生了影响其功能的变异位点，这可能改变了它们与发挥功能的复合物的结合力，从而抑制了细胞凋亡。因此，通过长期的低氧适应，高原鼢鼠肺组织中与细胞凋亡相关的基因产物结构发生变异，导致其基因表达水平发生变化，从而抑制细胞凋亡，这是高原鼢鼠适应地下低氧洞道生境的分子机制之一。

摘要:高原鼠兔(Ochotona curzoniac)对高原低氧环境有很强的适应性。我们研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔肝脏组织中表达。为了为了阐明LDH-C4在高原鼠兔肝脏组织中的作用,本文应用荧光定量PCR和western blot方法,测定了精子特异性乳酸脱氢酶基因(Ldh-c)在高原鼠兔肝脏组织中的表达水平；应用对 LDH-C4 特异性的抑制剂(N-isopropyl oxamate),通过肌肉注射后,研究了抑制剂对高原鼠兔肝脏组织中LDH比活力,LD和ATP含量的影响。结果表明,在mRNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔肝脏组织中均有表达,相对表达水平分别为0.22±0.04和0.97 ±0.20；当肌肉注射1ml 1M的抑制剂时,血液中抑制剂浓度为0.08mM,肝脏组织中LDH比活力(抑制剂组和空白对照组LDH比活力分别为4.99±0.29U/mg?prot和7.36±0.42U/mg?prot)、LD(抑制剂组和空白对照组LD含量分别为0.38±0.05 mmol/g?prot和0.53±0.03mmol/g?prot)和ATP(抑制剂组和空白对照组ATP含量分别为5.84±0.83nmol/mg?prot和7.78±1.06nmol/mg?prot)含量显著下降,抑制剂对LDH,LD和ATP的抑制率分别为30.19%、32.22%和24.94%。以上结果说明,Ldh-c在高原鼠兔肝脏组织中表达,LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其肝脏组织生命活动提供至少24%的ATP,这使高原鼠兔减小了在低氧环境中对氧气的依赖,增强了对低氧环境的适应力。

摘要:肺表面活性物质有助于维持肺泡结构，促进呼吸作用和对氧的吸收及利用，磷脂酰胆碱为肺表面活性物质磷脂主要成分。为进一步研究高原动物对低氧环境的适应机制，本文以青藏高原特有物种高原鼢鼠(Eospalax baileyi)和高原鼠兔(Ochotona curzoniae)为研究对象，应用生物信息学方法对编码磷脂酰胆碱合成途径中关键酶胆碱激酶基因Chok-α和Chok-β、磷酸胆碱胞苷转移酶基因Pcyt-α和Pcyt-β以及胆碱磷酸转移酶基因Cpt的序列进行进化分析，并以SD大鼠(Rattus norvegicus)为对照，测定了这些基因在肺组织中的mRNA表达水平。生物信息学结果表明， Chok-α、Chok-β、Pcyt-α、Pcyt-β和Cpt基因序列高原鼢鼠与以色列鼹鼠(Nannospalax galili)的同源性最高，高原鼠兔与北美鼠兔(O. princeps)的同源性最高，均高达90%以上；高原鼢鼠Cpt与以色列鼹鼠，高原鼠兔Chok-β、Pcyt-β和Cpt与北美鼠兔有平行进化位点。选择压力分析表明，高原鼢鼠Chok-α亚基第4位的赖氨酸、第5位点的苯丙氨酸和第10位的谷氨酸，高原鼠兔Chok-β亚基第4位蛋氨酸，高原鼢鼠Cpt第163位谷氨酸，这些位点均存在显著差异(P < 0.05)；SIFT评估结果发现，高原鼠兔的Chok-β亚基中第212位氨基酸变异位点和Pcyt-β亚基第18位氨基酸变异位点对其功能有显著影响(P < 0.05)。mRNA表达水平分析结果表明，高原鼢鼠Chok-α和Chok-β mRNA表达水平均显著高于高原鼠兔与SD大鼠(P < 0.01)，高原鼠兔Chok-β mRNA表达水平显著高于SD大鼠(P < 0.05)；SD大鼠Pcyt-α、Pcyt-β 和Cpt mRNA表达水平显著高于高原鼠兔和高原鼢鼠(P < 0.01)，而高原鼠兔与高原鼢鼠间无差异(P > 0.05)。以上结果表明，与SD大鼠相比，高原鼢鼠和高原鼠兔磷脂酰胆碱合成途径中关键酶氨基酸变异和基因表达水平的差异以及两种高原动物的生理适应，更利于它们在高寒低氧的独特环境中获取氧并利用氧，从而促进呼吸作用，以加强能量代谢并适应低氧环境。