摘要:为研究小鼠(Mus musculus)组蛋白H3K4甲基化酶基因Smyd3转录调控的分子机制,本研究首先通过PCR的方法克隆了5条不同长度的Smyd3启动子5端缺失片段,与pMD19-T载体连接后,双酶切克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,构建Smyd3启动子-pGL3-Basic报告基因重组质粒,瞬时转染HEK293细胞48 h后采用双报告基因检测试剂盒检测Smyd3启动子各缺失片段的相对荧光活性。结果表明,本研究成功构建Smyd3启动子5端缺失片段-pGL3-Basic荧光报告基因重组质粒,所构建的启动子重组子转染组与阳性对照组相比表现出荧光活性,并且pGL3-Smyd3-4的荧光活性最强,是其他的2至4倍左右,pGL3-Smyd3-5的荧光活性最弱。本研究初步确定Smyd3基因的启动子核心区域可能位于-533~-42 bp之间,在-2 026~-533 bp之间可能存在启动子负调控序列。

摘要:为了考察小鼠（Mus musculus）孤雌激活胚胎H3K27三甲基化模式与体内正常胚胎之间的差异，以及曲古抑菌素A （TSA）对孤雌胚H3K27三甲基化水平的影响，探究表观遗传修饰对孤雌胚胎发育的作用。首先，用H3K27me3特异性抗体对MⅡ期卵母细胞染色，利用激光共聚焦对其荧光强度进行检测，结果发现该时期的甲基化荧光强度相对较低。接着，采用同样的方法对小鼠孤雌胚胎和体内正常胚胎植入前各时期的H3K27me3模式进行比较，结果显示，从2-细胞到囊胚期孤雌组呈现逐渐升高的趋势，与体内组变化趋势完全相反，且总体平均荧光强度较体内组普遍偏低。孤雌胚胎经 TSA处理后，处理组和未处理组在前三个时期虽然没有显著性差异（P>0.05），但是处理之后的H3K27三甲基化水平有所提高，囊胚期与未处理组相比有显著性差异（P<0.05）。以上结果表明，小鼠孤雌胚胎的H3K27三甲基化模式与体内胚胎之间存在着巨大的差异，这可能是造成孤雌胚胎发育能力差的重要原因之一。TSA处理对H3K27me3模式造成了一定的影响，使体外培养环境有所改善，这可能对提高孤雌胚胎发育能力具有一定的意义。

摘要:鲤(Cyprinus carpio)胰岛素样生长因子2b(insulin-like growth factor 2b,IGF2b)基因为鲤IGF基因家族重要的成员,已有的研究表明5侧翼区序列对其功能的发挥有重要作用。因此,采用基因组步移法获取5侧翼区序列,通过亚硫酸盐修饰的方法分析不同品种该区域GC富集区的甲基化状况。本文成功从鲤基因组DNA中获得695 bp的IGF2b 5侧翼区序列。已获取的IGF2b 5侧翼区序列经过TFSEARCH分析后发现了多个转录因子结合位点和TATA框,通过BLAST比对发现,鲤IGF2b 5侧翼区DNA序列与斑马鱼(Danio rerio)IGF2b基因相比,相似性为87%。检测该区域富含GC的序列17个位点,发现建鲤(C.c.var.jian)有2个个体的3个位点出现甲基化,而黄河鲤(C.c.haematopterus)只有1个个体1个位点出现甲基化,这说明2个品种鲤在这个区域出现甲基化修饰的几率低,也验证了这2品种在该基因该区域GC富集区是稳定的。